Chapitre 1. Introduction à la technique de cytométrie en flux
La cytométrie en flux ou FACS (fluorescence-assisted cell sorting) est une technique
d’analyse de phénotype cellulaire assistée par ordinateur.
Chaque cellule présente dans un échantillon donné (cellules isolées et mises en
suspension) est analysée individuellement : la puissance de cette technique réside donc
dans la possibilité d’analyser un grand nombre de cellules en un temps relativement
court, conférant à la technique une robustesse statistique intéressante.
La cytométrie en flux permet d’analyser deux types de
paramètres :
les paramètres morphologiques, taille et granularité ;
les paramètres de fluorescence, liés à l’utilisation de marqueurs
fluorescents. Cette technique est en particulier utilisée pour analyser par
immunodétection l’expression de marqueurs de surface caractéristiques de
populations leucocytaires.
Dans cet exemple, on cherche à identifier les lymphocytes T parmi une
population de lymphocytes B et T. Les LT expriment le marqueur de surface CD3, et les LB
ne l’expriment pas. On utilise donc des anticorps anti-CD3 couplés à un fluorochrome
pour marquer en fluorescence la population de LT de façon spécifique.
En combinant différents anticorps couplés à des fluorochromes distincts, on
peut analyser simultanément un grand nombre de paramètres (expression de différents
marqueurs de surface par exemple). Le nombre de paramètres analysables dépend du
cytomètre utilisé, les plus performants analysant jusqu’à 19 paramètres simultanément.